補(bǔ)腎更年方對(duì)去除卵巢大鼠血清 E2 水平及下丘腦 EＲα 蛋白表達(dá)的影響
張?zhí)m1 邰迎春1 王淵2 侯淑紅1＊＊ 雷莉妍2
( 1． 陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西 咸陽(yáng) 712000; 2． 陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽(yáng) 712046)

摘 要: 目的 治療補(bǔ)腎更年方對(duì)去除卵巢大鼠血清 E2 水平和下丘腦 EＲα 蛋白表達(dá)的影響，探討其效應(yīng)機(jī)制。方法 將 40 只大鼠用手術(shù)去除卵巢后隨機(jī)分為補(bǔ)腎更年方大劑量組、中劑量組、小劑量組和己烯雌酚組，并與 10 只模型組和 10 只空白組做對(duì)照，補(bǔ)腎更年方大、中、小劑量組以不同劑量灌胃，模型組和空白組以生理鹽水灌胃，己烯雌酚組以己烯雌酚按 1mL/100g 的劑量灌胃，連續(xù) 45 d，結(jié)束后，取血，放免法檢測(cè)血清 E2，Westernblot 法檢測(cè)大鼠下丘腦 EＲα 蛋白表達(dá)。結(jié)果 與空白組比較，模型組大鼠血清 E2 水平顯著降低、下丘腦 EＲα 蛋白表達(dá)顯著減少( P ＜ 0． 01) ; 與模型組比較，補(bǔ)腎更年方大、中劑量組和己烯雌酚組能夠顯著升高大鼠血清 E2水平并增加下丘腦 EＲα 蛋白表達(dá)( P ＜ 0． 05) ，補(bǔ)腎更年方小劑量組對(duì)其無(wú)明顯影響( P ＞ 0． 05) 。

結(jié)論 補(bǔ)腎更年方在改善去除卵巢大鼠血清 E2 水平同時(shí)，可能通過(guò)影響 EＲα 蛋白的表達(dá)，提高 EＲ 的生物效應(yīng)，從而發(fā)揮對(duì)更年期綜合征的治療效應(yīng)。
關(guān)鍵詞: 去除卵巢大鼠; 補(bǔ)腎更年方; E2 ; EＲα
中圖分類號(hào): Ｒ271． 11 + 2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼: A

更年期綜合征( menopausal syndrome，MPS) 是一種以植物神經(jīng)功能紊亂為主要表現(xiàn)伴有神經(jīng)心理癥狀的婦科常見(jiàn)癥候群，對(duì)婦女的工作、生活以及身心健康產(chǎn)生了較為嚴(yán)重的影響［1］。由于現(xiàn)代社會(huì)人們生活方式的改變、身心壓力的與日俱增以及人口老齡化結(jié)構(gòu)的形成，本病發(fā)病率逐年上升且發(fā)病年齡較以往提前［2 － 3］。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腎虛為本病根本病機(jī)，有鑒于此，我們以滋陰降火為治法，自擬補(bǔ)腎更年方，在臨床取得了良好療效。本研究擬治療補(bǔ)腎更年方對(duì)去除卵巢所致更年期綜合征大鼠血清雌二醇( E2 ) 水平和下丘腦雌激素受體 α( EＲα) 蛋白表達(dá)的影響，以期進(jìn)一步明確其作用機(jī)制。
1 材料和方法
1． 1 藥物與試劑 補(bǔ)腎更年方( 熟地黃 15 g，地骨皮 12 g，山藥 10 g，知母 10 g，黃柏 10 g，白芍15 g，酸棗仁 15 g，yin羊藿 10 g，炙甘草 6 g) ，中藥飲片由陜西中醫(yī)中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房提供; 己烯雌酚片( 規(guī)格: 0． 5 g /片) ，天津力生制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 H12020154; 兔抗鼠 EＲα 蛋白抗體，兔抗鼠 GAPDH 抗體，Santa Cruz 公司; E2 免疫試劑盒，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司。
1． 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD 大鼠，雌性，2 ～ 3 月齡，體質(zhì)量 250 ± 20g，西安交通大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物合格證號(hào): SCXK( 陜) 2016 － 015 號(hào)。
1． 3 主要儀器設(shè)備 離心機(jī)( 廣州儀科實(shí)驗(yàn)室技術(shù)有限公司) ; 凝膠成像分析系統(tǒng)( BIO － ＲAD 公
司) ，Image － proplus 6． 0 圖像分析系統(tǒng)( Media Cybernetics 公司) ; γ － 911 全自動(dòng)放免計(jì)數(shù)儀( 中國(guó)科技大學(xué)實(shí)業(yè)總公司) 。
1． 4 分組、模型組大鼠制備方法 將大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、西藥組、補(bǔ)腎更年方大劑量組、中劑量組、小劑量組共 6 組，每組 10 只。模型組大鼠即 去 除 卵 巢 大 鼠，采 用 10 % 水 合 氯 醛，以300 mg /kg的劑量通過(guò)腹腔注射將大鼠麻醉后，將其進(jìn)行仰臥位固定，對(duì)其下腹部進(jìn)行備皮消毒，切口部位定位于下腹部陰道口上方 2 cm 處，對(duì)此處進(jìn)行正中切口，長(zhǎng)度為 1cm，再將腹壁進(jìn)行逐層切開(kāi)，暴露雙側(cè)卵巢并在其下方進(jìn)行結(jié)扎，將其切除，用青霉素對(duì)此部位進(jìn)行沖洗，后將腹壁肌層和皮膚連續(xù)縫合［4］。

1． 5 空白組大鼠制備方法 即假手術(shù)組，麻醉、體位、切口、消毒、縫合同模型大鼠制備方法，但不切除卵巢，而是將卵巢周圍少量脂肪組織清除。
1． 6 各組干預(yù)方式 對(duì)于補(bǔ)腎更年方組，將補(bǔ)腎更年方各組成藥物，煎煮 濃 縮 成 湯 劑，大 劑 量 組 按1． 5mL/100g、中 劑 量 組 按 1mL/100g、小 劑 量 組 按0． 5mL/100g，對(duì)大鼠進(jìn)行灌胃; 對(duì)于西藥組，將己烯雌酚片用蒸餾水制成含有己烯雌酚 0． 01 mg /mL 的溶液，按1mL/100g 的劑量對(duì)大鼠進(jìn)行灌胃; 對(duì)于空白組和模型組，均在每日同一時(shí)段進(jìn)行同種程度抓取，采用生理鹽水，按 1mL/100g 的劑量對(duì)大鼠進(jìn)行灌胃。上述6 組均進(jìn)行每日1 次的干預(yù)，連續(xù)治療45d。

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