酶聯免疫吸附法中有技術問答精辟解析

上海恒遠生物公司所采用的酶免疫測定（enzyme immunoassay, EIA）或免疫酶技術（immunoenzymatic technique）是指用酶標記抗體或酶標記抗體進行的抗原抗體反應。它采用抗原與抗體的特異反應與酶連接，然后通過酶與底物產生顏色反應，用于定量測定。目前常用的方法稱為酶聯免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA），其方法簡單，方便訊速，特異性強。ELISA是由抗原（抗體）先結合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體（抗原）與酶結合成的偶聯物（標記物），此偶聯物仍保留其原免疫活性與酶活性，當偶聯物與固相載體上的抗原（抗體）反應后，再加上酶的相應底物，即起催化水解或氧化還原反應而呈顏色。那么酶聯免疫吸附法中有哪些技術問答，請點擊恒遠查詢相關解析：（以下是根據客戶問題整理精品解答）

問：人的Quantikine ELISA試劑盒是否有相關的對照？ 答：上海恒遠R&D 為人的Quantikine ELISA試劑盒提供三重對照組。請同我們以便確定產品的目錄號。 問：我想使用你們目錄中的重組蛋白作為我的ELISA的對照，但我發現質量上有差異。這是為什么？ 答：首先要考慮的是重組蛋白的質量會高出試劑盒的可測試范圍數倍，必須將重組蛋白稀釋多次才能得到試劑盒的測試范圍。一般來說是從mg/毫升稀釋到pg/毫升，在這中間光是移液管的誤差就達到了可測量的水平。 其次要考慮的是R&D Elisa試劑盒的免疫測試方法測量的蛋白水平是用一種抗體捕獲的、用第二種抗體測定的，這種測定是在試劑盒研發時與標準蛋白校正過的。這些經過測定的早期標準蛋白成為基本校正物，后來的標準都同它校正。這樣不同生產批號的免疫測定試劑盒將是一致的。這些基本校正物蛋白質量的測量方法也許與你的試劑管中蛋白質量的測定方法有所不同。 問：什么是競爭性ELISA? 答：競爭ELISA基于競爭結合技術，即樣本中的待測分子與固定量的標記的同樣分子（我們一般用堿性磷酸酶作為標記）同時與固定在孔板上的抗體的同一結合位點進行競爭，參照標準曲線，試驗數據值是定量的。 問：什么是夾心ELISA？ 答：夾層ELISA采用對樣本中分析物的特異的抗體作為固定化的捕獲抗體，然后用第二個帶標記的抗體作檢測，檢測抗體對分析物也是專一的。當參照標準曲線時，試驗數據值是定量的。 問：什么是直接ELISA？ 答：直接ELISA是將被測的分析物直接包膜在微孔板表面，然后用測試抗體來證實被測分析物的存在。當與重組蛋白（標準曲線）進行參照時，試驗數據值是半定量的。 問：恒遠R&D 品牌的ELISA試劑盒可以做多少個樣本？ 答：R&D品牌的ELISA試劑盒為48T，96T的規格，分別48T可做6個標準曲線及42個樣本，96T可做12個標準曲線及84個樣本。 問：Quantikine ELISA試劑盒里都包括什么？ 答：R&D Systems的Quantikine ELISA試劑盒是一個完整的試劑盒。它包含了一個已包板的微孔板、酶標抗體、標準蛋白、稀釋劑、底物、終止劑、洗液和微孔板密封膜。所有試劑盒對實驗說明書中所列樣本都經充分驗證，確保高質量。 問：什么是DuoSet？ 答：DuoSet ELISA開發系統提供了足夠的捕獲抗體、測試抗體、標準蛋白和Streptavidin-HRP，可以做大約十五個96孔微孔板的實驗。我們還提供了樣本試驗流程和與這一系統配套的試劑。DuoSet ELISA開發系統主要是為高通量篩選細胞培養的上清液所設計，但熟悉ELISA研發的實驗人員已成功將其推廣到血清和血漿樣本的使用。 問：我是否可將標準曲線的兩端延伸？ 答：在任何情況下，我們都不支持超出確定范圍的實驗結果。在我們確定的測試范圍，我們保證實驗結果的可重復性。 問：為什么不將測試范圍延伸到所述的靈敏度？ 答：靈敏度是統計中大于零的可測到的zui低值。它是通過本底信號和試驗的可變性計算出來的。靈敏度是將20個零復制物的中值加兩個標準差從標準曲線換算成分析物的濃度。而zui低標準是我們可以放心的、仍可與標準曲線成直線相關的zui低點，因而是可定量的。