技術(shù)解析腫瘤壞死因子的檢測方法

 技術(shù)員根據(jù)腫瘤壞死因子的實驗，揭示了腫瘤壞死因子(tunlornecrosisfactor，TNF)有α和β兩種類型，后者亦稱淋巴毒素(lymphotoxin，LT)，雖然產(chǎn)生的細胞類型不盡相同，但能與相同的受體結(jié)合，故二者的生物學活性極其相似；此外，二者又有膜結(jié)合型與分泌型兩種形式。
TNF-α與β在體內(nèi)、外均可對一些腫瘤細胞或細胞系起殺傷作用，而對體外培養(yǎng)的多種正常細胞則無細胞毒效應。根據(jù)這一特點，可利用對TNF敏感的靶細胞測定TNF活性。zui常用的方法是檢測TNF對小鼠成纖維細胞株L929或L-M細胞的細胞毒活性，細胞死亡率與TNF活性成正比。并可用特異性中和抗體來區(qū)別TNF-α與TNF-β。檢測細胞毒活性可用51Cr釋放法或染料染色方法。

利用抗原—抗體反應檢測TNF，可采用RIA、ELISA、間接免疫熒光法及免疫組化法。RIA及ELISA可用于待檢樣品的定量，現(xiàn)已有國產(chǎn)的TNF ELISA試劑盒出售，方法簡便、敏感且特異。而間接免疫熒光法及免疫組化法可用于對TNF的組織定位或觀察TNF在細胞內(nèi)及胞膜的定位。
TNF-α分為跨膜型及分泌型，前者分子量為26kD，而后者則為17kD。可借助SDS-PAGE電泳，將蛋白按分子量大小分開，再用免疫印跡技術(shù)特異性地顯示兩種類型的TNF-a。

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