“恒遠(yuǎn)公司”ELISA操作流程

 ELISA操作流程：

1. 根據(jù)需要，將若干孔德條帶放置在支架上；

 

2. 將標(biāo)本、陰性質(zhì)控、陽性質(zhì)控以及標(biāo)準(zhǔn)品作 1：200 稀釋（將５μｌ樣品加稀 釋液稀釋到 1ml，混勻） ；

 

3. 取 100μl 已稀釋的血清樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和陰性質(zhì)控、陽性質(zhì)控加入相應(yīng)得孔板 內(nèi)（質(zhì)控和標(biāo)準(zhǔn)品至少需做兩孔） ，A1 孔不加液體作為空白底色；

 

4. 在 37℃溫箱中放置 30 分鐘；

 

5. 到時(shí)間后將孔被液體甩去，并用 1X 洗滌液反復(fù)清洗 4 次，zui后用蒸餾水洗 一次；

 

6. 在每孔內(nèi)加 100μl 酶結(jié)合物（需按比例稀釋，除 A1 孔外） ，輕微混勻；

 

7. 在 37℃溫箱中放置 30 分鐘；

 

8. 甩去孔內(nèi)酶結(jié)合物，用 1X 洗滌液反復(fù)清洗 4 次，zui后用蒸餾水洗一次； （包括 A1 孔也加） ，輕微

 

9. 在每孔內(nèi)加 100μlTMB（使用前混合Ａ液和Ｂ液） 混勻；

 

10. 37℃放置 15 分鐘； ，輕微混勻；

 

11. 每孔加 50μl 1N 硫酸終止液（包括 A1 孔）

 

12. 在 15 分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在 450nm 處讀取吸光度值（OD 值） （將酶標(biāo)儀 A1 孔設(shè)定為空白孔） 。

 

二、 ELISA試劑盒結(jié)果換算：

 以標(biāo)準(zhǔn)樣品的 OD 值為軸，標(biāo)準(zhǔn)樣品的數(shù)值為 X 軸，在方格紙或計(jì)算機(jī)上作 出標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)標(biāo)本的 OD 值讀數(shù)在標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出相應(yīng)的 IgG 抗體 濃度。

 

三、 ELISA試劑盒結(jié)果判定：

 陰性：抗體濃度≤20u/ml 為正常 陽性：抗體濃度＞20u/ml 為陽性

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