盡管ELISA測定的操作步驟非常簡單，但有可能會影響測定結果的因素卻較多，分布在測定操作的各步之中，尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測定中出現問題的可能原因，特對常見問題及原因歸納總結于下表。   
臨床ELISA測定中可能會出現的問題及可能的原因問題 
可能的原因（非試劑盒本身的原因） 

1．弱陽性質控樣本檢測不出 溫育的時間或溫度不夠；顯色反應時間太短；所用配制緩沖液的蒸餾水有問題 
2．測定的重復性差 （相同樣本兩次測定結果不一致） 這是典型的由測定操作引起的問題，包括 
（1）加樣本及試劑量不準；孔間不一致； 
（2）加樣過快，孔間發生污染； 

（3）加錯樣本； 

（4）加樣本及試劑時，加在孔壁上部非包被區； 
（5）不同批號試劑盒中組分混用； 
（6）溫育時間、洗板、顯色時間不一致； 
（7）孔內污染雜物； 
（8）酶標儀濾光片不正確； 

（9）血清標本未*凝固即加入，反應孔內出現纖維蛋白凝固或殘留血細胞，易出現假陽性反應等。
 3．白板 
（陽性對照不顯色） 
（1）漏加酶結合物； 

（2）洗板液配制中出現問題，如量筒不干凈，含酶抑制物（如疊氮鈉）等。 
（3）漏加顯色劑A或B； 
（4）終止劑當顯色劑使用。 

4．全部板孔均有顯色 
（1）洗板不干凈； 
（2）顯色液變質； 

（3）加底物的吸光受酶污染； 
（4）洗板液受酶等污染。
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