Western免疫印跡常見問題解答之信號弱

Western免疫印跡常見問題解答之信號弱

表現(xiàn)為在1-30秒曝光后仍然檢測不到目的條帶，上海恒遠生物為您列表可能出現(xiàn)的原因及解決辦法，歡迎點擊閱讀賞析，如有任何問題均可我司。

原因	解決方法
一抗與膜的孵育時間不夠	磷酸化蛋白抗體是針對于特定的一個或兩個磷酸化位點的，特異性很高但往往比常規(guī)的抗體能得到的信號要弱一些。用合適的緩沖液稀釋，并在4°C與膜孵育過一夜，對于磷酸化抗體來說很關鍵。
電泳后的蛋白沒有全部轉(zhuǎn)移到膜上	增加轉(zhuǎn)膜所用的時間或電壓。通過預染分子量標準品判斷轉(zhuǎn)膜是否*，不建議用染料染膜來觀察，因為這樣會抑制化學發(fā)光反應。
膜的封閉時間過長	在牛奶中封閉時間太長會遮蔽抗原表位并會把轉(zhuǎn)移到膜上的蛋白置換下來。封閉只需1小時（決不要過一夜封閉）。
目的基因的表達量太少，低于檢測底限。	每條泳道中上樣總蛋白20 μg通常就足夠了。如果目的基因的表達水平較低，則可以增加上樣量?；蚴窃谧鯯DS-PAGE之前先做免疫沉淀。嘗試其他細胞系或是高表達該蛋白的組織樣品。
二抗太弱。	換用其他批次的二抗或是提高二抗的濃度。
LumiGLO?試劑沒有按規(guī)定配制或是儲存液試劑A和B已經(jīng)相互污染。	重新配制LumiGLO?試劑。用抗生物素-HRP和生物素標記的分子量標準品作為化學發(fā)光檢測反應的陽性對照。

上海恒遠生物全程技術指導。(包括售前的標本收集，使用過程中不明白的地方，實驗結(jié)束后的數(shù)據(jù)分析，有任何疑問，我們技術都會即時給你去電).