恒遠(yuǎn)詳解雜交瘤的具體保存及復(fù)蘇

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我們根據(jù)實(shí)驗(yàn)分析雜交瘤的保存

    當(dāng)獲得產(chǎn)生所需的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞后，必須將一部分雜交瘤細(xì)胞保存，否則在連續(xù)傳代的過(guò)程中，可能產(chǎn)生突變或染色體的漂移以至喪失固有特性或丟失產(chǎn)生抗體的特性。另外在長(zhǎng)期的培養(yǎng)過(guò)程中，難免不發(fā)生污染以至于毀滅。所以必須冷藏保存一部分。保存方法如下：

    1．材料

    (1) 細(xì)胞：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞。

    (2) 10％二甲基亞砜保護(hù)液（二甲基亞砜能損壞濾器，而又被高壓所破壞，所以不能過(guò)濾或高壓消毒。其本身就是品，無(wú)菌）：含10％二甲基亞砜、20％滅活胎牛血清，70％RPMI—1640液。

    (3) 20％FCS—1640培養(yǎng)液：含青霉素100U/ml，鏈霉素100μg/ml。

    (4) 滅菌的2ml安瓶等

    2．操作方法

    (1) 去掉細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的舊的培養(yǎng)液，加入10％FCS—1640液，使細(xì)胞懸浮。

    (2) 1 000r/min離心10min，去上清。細(xì)胞沉淀用10％二甲基亞砜保護(hù)液制成懸液，使成1.0×107細(xì)胞／ml。

    (3) 取樣，臺(tái)盼蘭染色，計(jì)數(shù)活細(xì)胞，應(yīng)在95％以上。

    (4) 用注射器將細(xì)胞分裝安瓶，每瓶0.5ml～1.0ml，熔封安瓶。

    (5) 放4℃ 2h。

    (6) 放液氮罐氣態(tài)部分（-70℃）15h。

    (7) 轉(zhuǎn)入液氮部分。

    （二）復(fù)蘇

    1．從液氮罐中取出安瓶立即放37℃水浴中速溶。

    2．無(wú)菌操作打開安瓶，取出細(xì)胞懸液，轉(zhuǎn)入組織培養(yǎng)瓶。

    3．逐滴緩慢加入20％FCS－1640培養(yǎng)液3.5ml，這個(gè)過(guò)程延續(xù)3min。

    4．5％CO2飽和濕度，37℃培養(yǎng)。

    5．4h后棄去培養(yǎng)液上清，加入新鮮的20％FCS－1640培養(yǎng)液。

    6．繼續(xù)培養(yǎng)，換液，以至形成單層。

看完以上建議，您應(yīng)該對(duì)雜交瘤有所了解了吧，我司從事試劑盒，試劑研究多年，有著豐富的科研經(jīng)驗(yàn)，為您在生物領(lǐng)域開辟新的實(shí)驗(yàn)成功。上海恒遠(yuǎn)生物，您身邊的科研專家！