ELISA實驗結果OD值為何偏低？

ELISA實驗是一個非常嚴謹、極其考驗操作者技巧和經驗的實驗，檢測結果數(shù)值低、標準曲線梯度差、背景值高、變異系數(shù)大等諸多問題也是兵家常事。有很多客戶向我們咨詢，ELISA實驗結果數(shù)據(jù)總是偏低，不知道是什么問題。恒遠生物就為大家總結一下具體原因，一起來看看吧！




一、整體OD值偏低或無信號：

1.試劑盒組分失活

相應對策：使用新的試劑盒，按照說明書要求保存試劑盒

2.試劑盒組分未平衡

相應對策：試劑盒每個組分都需要平衡至室溫后進行實驗

3.試劑混用或混合不充分

相應對策：保證使用試劑盒內完整一套試劑進行實驗，保證溶液充分混合

4.洗液被污染

相應對策：配制新的洗液

5.洗滌液浸泡時間過久或洗板次數(shù)過多

相應對策：按照說明書的要求進行操作

6.孵育時間不充分

相應對策：保證充足的孵育時間

7.孵育溫度不穩(wěn)定

相應對策：檢查恒溫箱，確保孵育溫度穩(wěn)定

8.生物su化抗體或HRP酶結合物不足

相應對策：保證濃縮液取量準確且稀釋完

9.生物su化抗體或酶結合物稀釋不正確或步驟顛倒

相應對策：按照說明書的步驟和要求進行操作

10. 未加終止液

相應對策：反應結束時，確保每孔加入終止液終止反應

11.終止后未及時讀板

相應對策：終止液終止反應后需要在10min內進行讀板操作

12.酶標儀設置錯誤

相應對策：在酶標儀上檢查波長和濾光片設置




二、標曲線性佳但樣本OD值偏低

1.標準品部分降解

相應對策：按照說明書推薦方式保存標準品。開封后的標準品應以高濃度用EP管分裝凍存，保存于-20℃，半個月內使用有效。

2.標準品復溶不當

相應對策：打開前將標準品短暫離心，檢查復溶后是否有未溶解的物質

3.標準品稀釋不正確

相應對策：按照說明書要求，保證按正確倍比梯度稀釋




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